匯百試劑Tris在新型冠狀病毒檢測試劑盒中的應用
2/11/2022 4:46:36 PM
三羥甲基氨基甲烷(簡稱Tris，又名氨丁三醇)是一種重要的生物緩沖劑， 25℃下的pKa為8.06，pH緩沖范圍：7.0-9.0，廣泛應用于生物化學、分子生物學等領(lǐng)域中緩沖液的制備。CN111551743A 專利中，介紹了Tris在新型冠狀病毒檢測試劑盒中的應用。該試劑盒由6部分組成，具體為：發(fā)光底物液A、發(fā)光底物液B、樣品稀釋液、酶標工作液、校準品和磁珠懸浮液。接下來由匯百侍小編簡述一下該試劑盒各組分的構(gòu)成及制備方法。
1.發(fā)光底物液A
發(fā)光底物液A由Tris，鹽酸和魯米諾三部分組成；
制備方法：稱取各組分，分別溶于蒸餾水中，定容，即得；其中Tris 0.01-0.05g/L，鹽酸0.002-0.01ml/L，魯米諾0.001-0.007g/L；
2.發(fā)光底物液B
發(fā)光底物液B由磷酸二氫鈉，磷酸氫二鈉，過氧化脲和氯化鈉四部分組成；
制備方法：稱取各組分，分別溶于蒸餾水中，定容，即得；其中磷酸二氫鈉0.1-0.5g/L，磷酸氫二鈉2.0-4.0g/L，過氧化脲0.002-0.05g/L，氯化鈉3-15g/L。
3.樣品稀釋液
樣品稀釋液由BSA(牛血清白蛋白)，氯化鈉和ProCLin300三部分組成。
制備方法：稱取各組分，分別溶于蒸餾水中，定容，即得；其中BSA 8-15g/L，氯化鈉5-12g/L，ProCLin300 0.1-1ml/L；
4.酶標工作液
酶標工作液由辣根過氧化物酶標記的新型冠狀病毒抗原(nCov-Ag-HRP)，磷酸二氫鈉，磷酸氫二鈉，氨基比林，ProCLin300和CaSein(酪蛋白)六部分組成。
制備方法：稱取各組分，分別溶于蒸餾水中，定容，即得。其中nCov-NAg-HRP 0.3-1.0mg/L，nCov-SAg-HRP 0.8-1.5mg/L，磷酸二氫鈉0.05-0.4g/L，磷酸氫二鈉2.0-4.0g/L，氨基比林0.2-1.5g/L，ProCLin300 0.1-1.0ml/L，CaSein(酪蛋白)1.0-4.0g/L；
5.校準品
本發(fā)明專利所用校準品為人源性血清。
6.磁珠懸浮液
磁珠懸浮液包括偶聯(lián)有抗人IgM抗體的磁微粒。
制備方法：稱取磁微粒，用碳二亞胺(EDC)活化，加入抗人IgM抗體，混懸，清洗，定容。偶聯(lián)有抗人IgM抗體的磁微粒(以磁微粒的質(zhì)量計)0.2-2g/L，其中，1g磁微粒上偶聯(lián)有1-2g 的抗人IgM抗體；
使用以上方法制備的試劑盒有以下有益效果：
①該試劑盒將新型冠狀病毒的N蛋白和S蛋白片段共同作為抗原，二者聯(lián)合使用提高了試劑盒的檢出率、靈敏度和特異性。
②該試劑盒對磁微粒上偶聯(lián)的抗人IgM抗體的種類進行了特定選擇，結(jié)果發(fā)現(xiàn)鼠抗人IgM抗體用于本發(fā)明具有相對更好的效果，陽性檢出率更高。
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